Western一抗二抗去除液的作用
Western一抗二抗去除液，用于Western Blot 中轉(zhuǎn)印了蛋白的膜的重復(fù)利用。在Western Blot中完成了一 抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測后，有時(shí)還需要檢測 Actin、Tubulin 等內(nèi)參蛋白或檢測其它蛋白進(jìn)行比較。通過使用Western一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白，與重新跑SDS-PAGE膠相比，不僅省時(shí)省力，而且可以消除重新上樣而帶來的誤差，使可比性更強(qiáng)。
Western一抗二抗去除液可變性已經(jīng)結(jié)合的抗體，使其失活，從而將同一張膜再用于其它抗體的雜交。與其它類型的一抗二抗去除液相比，該試劑不破壞抗原，處理過程中膜上抗原不丟失，因此可重復(fù)應(yīng)用的次數(shù)更多、靈敏度更高。主要特征
操作簡單快速對抗原蛋白作用溫和，不會(huì)造成抗原蛋白的損轉(zhuǎn)印膜至少可重復(fù)使用3~5次
應(yīng)用
蛋白印記雜交膜（PVDF膜和NC膜）的再利用。
儲(chǔ)存
4°C保存，有效期1年。
蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗(yàn)）即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針"是抗體，“顯色"用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。
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