明膠酶譜法分析試劑盒再次獲得山東大學(xué)齊魯醫(yī)院老師！
簡(jiǎn)介：
山東大學(xué)是中國近代高等教育的起源性大學(xué)。其主體是1901年創(chuàng)辦的山東大學(xué)堂，是繼京師大學(xué)堂之后中國創(chuàng)辦的第二所國立大學(xué)，也是中國所按章程辦學(xué)的大學(xué)；其醫(yī)學(xué)學(xué)科起源于1864年，開啟近代中國高等醫(yī)學(xué)教育之先河。從誕生起，學(xué)校先后歷經(jīng)了山東大學(xué)堂、國立青島大學(xué)、國立山東大學(xué)、山東大學(xué)以及由原山東大學(xué)、山東醫(yī)科大學(xué)、山東工業(yè)大學(xué)三校合并組建的新山東大學(xué)等幾個(gè)歷史發(fā)展時(shí)期。
產(chǎn)品原理：
本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測(cè)MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法，其靈敏度可達(dá)1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測(cè)少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測(cè)靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè)，如果小膠加樣孔為10~15個(gè)，則總計(jì)可檢測(cè)500~750個(gè)樣品。
明膠酶譜法分析試劑盒再次獲得山東大學(xué)齊魯醫(yī)院老師！
染色步驟：
1. 此染色液即為工作液，使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝
膠，并緩慢搖動(dòng)2h；
2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；
3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動(dòng)2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進(jìn)行脫色，直至獲得清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景（通常此過程需要2～4h，也可脫色過夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景）；
4. 對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置（P2000）對(duì)
凝膠進(jìn)行處理后保存。
安全性：含有甲醇，無特殊毒性，按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理
參考文獻(xiàn)：
1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494
2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamidegels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem，1980, 102,196–202
3.綠茶多酚EGCG增強(qiáng)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及其相關(guān)機(jī)制研究
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